PCR實驗室現(xiàn)存的不足

▲1、PCR實驗過程中易發(fā)生污染

① PCR擴增產物的污染。這也是*常見的污染原因。PCR產物經反復多次的擴增，其復制量遠遠超過PCR的檢測極限，所以即使是極微量的污染也足以造成實驗結果假陽性。

② 試劑的污染。在試劑的配制過程中，接觸了污染的容器、移液器、槍頭、溶液等物導致試劑被污染。

③ 待測樣品被污染。放置樣品的容器被污染或由于容器密封不嚴導致樣品與外界接觸被污染;其次在核酸提取過程中使用了被污染的移液器或槍頭導致樣品被污染;另外，某些樣品中含有病毒，若彌散到空氣中則有可能形成交叉污染。

④ 氣溶膠污染。若氣溶膠中包含病毒等污染物擴散至空氣中極有可能造成PCR產物污染。氣溶膠是由空氣與液體表面摩擦而產生的，開蓋、晃動反應管及污染加樣器的反復吸樣都可形成氣溶膠從而導致交叉污染。據(jù)計算一個氣溶膠顆粒可含48 000 拷貝，因此，應尤其重視由氣溶膠導致污染的問題。PCR 實驗室只要出現(xiàn)了污染，之前的結果報告就變?yōu)闊o效而且也無法進行其他的實驗操作。必須找出并徹底清除污染源，才能得到準確有效的實驗結果。

▲2、實驗室的質量控制存在缺陷

實驗室的質量控制分為：室內質量控制和室間質量控制。

室內質量控制是指實驗室人員通過一定的方法和步驟，連續(xù)評價實驗室工作的可靠程度，旨在監(jiān)測和控制實驗室常規(guī)工作的精密度，提高實驗室常規(guī)工作中批內、批間樣本檢驗的一致性，以確定測定結果是否可靠及可否發(fā)出報告的一項工作。

室間質量控制是指客觀比較實驗室的測定結果與靶值的差異，由外部機構采取一定的方法，連續(xù)、客觀地評價實驗室的結果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結果，使各實驗室之間的結果具有可比性。

▲3、規(guī)范管理不到位

為了提高實驗室的檢測質量，避免實驗室污染以及確保實驗室的生物安全，規(guī)范有效的管理是實現(xiàn)這一切的根本措施。但有時會出現(xiàn)管理不到位甚至是疏忽的地方，比如隨意出入實驗室，甚至逆行;沒有按照規(guī)范穿戴口罩、鞋套;試驗期間緩沖間兩側門同時打開;實驗完畢后忘記開紫外燈消毒等。

pcr實驗室解決污染辦法

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